反相C18分离中，水能与许多有机溶剂混合，如水-甲醇、水-乙腈、水-四氢呋喃等，对不同的样品分离结果也千差万别。在流动相中加入适当的改良剂如三乙胺或乙酸，可以抑制硅胶表面残留的硅羟基的酸性，从而减少对酸或碱性组分的保留，减少拖尾；且调节流动相的PH，对酸性或碱性组分的选择性有很大改变。对于酸性组分来说，当流动相的PH＜7时，会增加在色谱柱上的保留时间；对于碱性样品来说，当流动相的PH≥7时，碱性组分为游离型（RNH2），极性小、保留时间增长、在固定相与流动相之间可以多次分配，增加碱性组分的选择性。

 

　　C18反相色谱柱适用于质量控制及研发过程中大多数物质的分离。由于采用了*的表面键合及封端技术，有效地限制了碱性，酸性和金属螯合物质的二次相互作用。C18反相柱的固定相是非极性固定相，流动相极性大于固定相极性，常用溶剂一般为水和甲醇、四氢呋喃、异丙醇等与水互溶的溶剂，适应于分离非极性或弱极性的化合物，其样品洗脱顺序为样品极性由高到低。