c18色谱柱利用非极性的反相介质为固定相，极性有机溶剂的水溶液为流动相，根据溶质极性（疏水性）的差别进行溶质分离与纯化的洗脱色谱法。

 

　　在硅胶基质的反相填料中，以键合有C18、C8、C2的球形多孔填料为常见，用途广。通过键合CN键，改变反相介质极性，就变成了正相色谱。

 

　　c18色谱柱固定相稳定，应用广泛，可使用多种溶剂。但硅胶为基质的填料，使用时一定要注意流动相的PH范围。一般的C18柱PH值范围都在2-8，流动相的PH值小于2时，会导致键合相的水解；当PH值大于7时硅胶易溶解；经常使用缓冲液固定相要降解。

 

　　c18色谱柱的影响因素：

 

　　1、柱长

 

　　有机小分子和肽类的分辨率随柱长的增加而增加。但是柱长增加并不能使蛋白质和核酸等生物大分子的分辨率显着增加。它们在较短的柱子上往往也有很好的分离效果。

 

　　2、流动相的流速

 

　　有机小分子和肽类的分辨率对流动相流速非常敏感。而蛋白质和核酸等生物大分子的分辨率则不然。流速越小，柱子越长，色谱峰的宽度就越大，分辨率就越小。制备色谱上样过程中的流速对动态吸附容量影响很大。

 

　　3、温度

 

　　温度上升，流动相黏度下降，流动速度加快，且流动相与固定相之间的传质速度加快，使分辨率增加。同时，温度上升，分子热运动增加，疏水性作用减弱。升高温度要考虑目标物质的热稳定性。

 

　　4、流动相组成

 

　　流动相的极性越大，溶质的分配系数越大，洗脱时间越短。有机溶剂梯度的大小也会影响分辨率，一般梯度越小。分辨率越大。