反相色谱常用的流动相及其冲洗强度如下： H2O<甲醇<乙腈<乙醇<丙醇<异丙醇<四氢呋喃 常用的流动相组成是："甲醇-H2O"和"乙腈-H2O"，但由于乙腈具有一定的毒性，通常优先考虑"甲醇-H2O"流动相。 反相色谱中，溶质按其疏水性大小进行分离，极性越大疏水性越小的溶质，越不易与非极性的固定相结合，所以先被洗脱下来。

　　反相色谱柱ODS柱具有重现行性好，使用寿命更长，更好的满足制药企业和药物研发对液相色谱柱的严格要求。表面有*的硅羟基基团组成，硅烷的覆盖率高，在高或低的pH条件下不易水解和分解。是一种高纯度、大比表面积、高机械强度、较高的碳链覆盖率的新一代球形硅胶填料。金属不纯物含量极低，减少了有些螯合物在硅胶基质柱上的络合作用。ODS柱是一种常用的反相色谱柱，也叫C18柱；由于它是长链烷基键合相，有较高的碳含量和更好的疏水性，对各种类型的生物大分子有更强的适应能力，因此在生物化学分析工作中应用的为广泛。