使用SkillPak预装柱实现快速稳健的层析工艺放大

东曹SkillPak预装柱平台可从5 mL层析柱无缝放大到200 mL层析柱。借助该平台，使用少量的样品和耗材即可设计层析工艺。一旦在小试规模下确定了最佳条件，其工艺过程即可轻松转至大规模应用。

01使用AEX和CEX分离蛋白质标准品

为了展示SkillPak出色的放大能力，我们使用了不同尺寸的层析柱（分别装填了TOYOPEARL NH2-750F和Sulfate-650F填料）分离两种不同的蛋白质标准品。图1和图2是分离蛋白质标准品时UV信号的比较结果。

图1 不同尺寸SkillPak (装填了TOYOPEARL NH2-750填料)分离蛋白质标准品

图2  不同尺寸SkillPak (装填了TOYOPEARL Sulfate-650F)分离蛋白质标准品

分离结果显示，不同尺寸层析柱上其洗脱曲线相似。线性盐梯度下，随着净表面电荷的增加，蛋白质逐渐脱落。不论何种情况，均可观察到随着柱体积的减小，保留体积向右移动。这主要是因为系统死体积的不同影响，导致作为参比CV时，保留体积更高

02牛血清白蛋白 (BSA) 的动态吸附载量

我们还在装填了TOYOPEARL NH2-750填料的5 mL、50 mL和200 mL的SkillPak层析柱上测定了BSA的动态吸附载量。

表1. 不同尺寸SkillPak上BSA的动态吸附载量

BSA在不同尺寸的层析柱上的DBC值非常接近，最大偏差为4%，表明吸附能力与层析柱尺寸无关，这一点对于工艺放大时的上样量来说非常重要。

我们可以通过小试验证确认其吸附能力，节省样品和缓冲溶液。随后，即可确定使用大型层析柱时所需的载量和最大上样量。

03 BSA的洗脱曲线

图3显示了不同尺寸SkillPak层析柱上BSA的洗脱曲线，证明了层析柱尺寸并不影响洗脱曲线。色谱图wan美重叠。wei一的区别是，最小柱体积的保留体积的偏移，这主要是因为系统死体积的不同影响所致。

图3. 不同尺寸SkillPak上BSA的洗脱曲线

如您想了解SkillPak预装柱的详细信息，欢迎联系我们索取产品资料。

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